Антинуклеарный фактор (HEp-2) в Санкт-Петербурге

Сведения об исследовании

Для подтверждения аутоиммунных заболеваний определяют антинуклеарный фактор (ANA-Hep2, он же — АНФ). Его выявление признано в мировых клиниках «золотым стандартом» в обнаружении антинуклеарных (антиядерных) иммуноглобулинов при подозрении на системную красную волчанку, смешанное соединительнотканное заболевание, на болезнь Шёгрена, склеродермию, полимиозит и другие патологии.

Диффузные заболевания соединительной ткани обусловлены сбоями в работе иммунной системы и увеличенным продуцированием антиядерных иммуноглобулинов к клеткам собственного организма. Эти антитела воздействуют на нуклеопротеиновые антигены — комплексы нуклеиновых кислот, белков клеточных ядер, цитоплазменные антигены. Воздействие ведёт к тканевым и органным воспалениям, к мышечным и суставным болям, вызывает состояние чрезмерного утомления, человек худеет, изменяется его кожа.

Антиядерные иммуноглобулины, направленные к многим ядерным и цитоплазматическим антигенам, особенно часто определяют при системной красной волчанке. ANA-Hep2 — важнейший инструмент дифференциальной диагностики:

• SS-B (La) и SS-A (Ro) ассоциированы с синдромом Шёгрена и системной красной волчанкой;
• Ig-Sm и Ig -dsDNA — с СКВ;
•  Ig к гистонам (ядерным белкам) — с лекарственной и СКВ;
• Ig -RNP — с MCTD (смешанное заболевание соединительной ткани) и СКВ;
• Ig -Scl-70 — с прогрессирующим системным склерозом (склеродермией);
• Ig -Jo-1 — с дерматомиозитом и полимиозитом;
• Ig к участкам хромосом центромерам ассоциированы с CREST-синдромом.

Антиядерные иммуноглобулины обнаруживают у 90 % и более людей со смешанным соединительнотканным заболеванием. Сегодня насчитывают примерно 200 разновидностей иммуноглобулинов к рибонуклеиновым кислотам, нуклеопротеинам. Все они имеют общее наименование — антинуклеарный фактор. Эти иммуноглобулины не способны к прямому цитотоксическому воздействию на клетку своего организма, но запускают иммунологические воспаления в местах с особенно тонкими сосудами — это ЦНС, кожа, почки, синовиальная оболочка суставов, плевра и т. д.

Для тестирования на АНФ применяется метод непрямой флюоресценции на эукариотических клетках HEp2 и HeLa. НЕр2 — самый подходящий субстрат для тестов, потому что клетки обладают крупными ядрами и вырастают на лабораторном стекле в 1 слой. Антиядерные иммуноглобулины выявляют в процессе взаимодействия с внутриклеточными антигенами эукариотических клеткок.

В процессе тестирования клетки эпителия HEp2 выращивают на лабораторном стекле, проводят их фиксацию и инкубацию с разведённой сывороткой крови. Затем избыток сыворотки удаляют, а HEp2 инкубируют с иммуноглобулинами, помеченными флуоресцеином. Далее промывают, а полученный биоматериал изучают под флуоресцентным микроскопом. Во время изучения устанавливают тип окрашивания и титр иммуноглобулинов.

Для постановки диагноза значим титр свыше 1:160. Если он выше 1:640 — это показатель острой стадии ревматической болезни. В период ремиссии значения титра составляют 1:160—1:320.

Флуоресцентное окрашивание показывает мишень антиядерных тел. Оно бывает периферическим, мелко- и крупногранулярным, ядрышковым, центромерным и цитоплазматическим. Все перечисленные типы имеют индивидуальные признаки, что очень важно при диагностировании:

• СКВ, волчанка лекарственная — диффузное окрашивание, иммуноглобулины к ядерным белкам, двуспиральной ДНК;
• СКВ — периферическое окрашивание, иммуноглобулины к ДНК;
• смешанное соединительнотканное заболевание — крупногранулярное окрашивание. Крапчатое, или гранулярное, свечение наблюдается при множестве аутоиммунных патологий, потому требует дополнительных тестов;
• болезнь Шёгрена, склеродермия — ядрышковое окрашивание, антитела к компонентам ядра. Подобное окрашивание и повышение титра антиядерных тел иногда фиксируют у больных с сахарным диабетом, тиреоидитом, тиреотоксикозом, полиэндокринным синдромом, кожными заболеваниями, а также у беременных, людей, перенёсших трансплантацию тканей и органов;
• CREST-синдром — центромерное окрашивание, антитела к центромерам хромосом;
• первичный билиарный цирроз, аутоиммунный гепатит — цитоплазматическое окрашивание, антитела к тРНК-синтетазе;
• несколько типов окрашивания одновременно — антитела к разным компонентам ядра.

Основываясь на полученных данных о характере свечения, врач при необходимости назначает дополнительные тесты, разрабатывает терапевтическую тактику.

Цели исследования:

• диагностирование СЗСТ;
• дифференциальное диагностирование ревматических заболеваний;
• оценка эффективности лечения аутоиммунного заболевания;
• мониторинг течения заболевания соединительной ткани.

В каких случаях назначают исследование:

• если у человека проявились симптомы аутоиммунной болезни, выраженные в перманентном повышении температуры тела, в суставных болях, переутомлении, похудении без явных причин, изменении кожного покрова;
• если выявлены изменения, связанные со смешанной соединительнотканной болезнью: повышенная скорость оседания эритроцитов, высокий уровень белка острой фазы (С-реактивного), повышенный уровень циркулирующих иммунных комплексов, которые оседают на стенках капилляров и провоцируют симптоматику заболеваний. 

Синонимы: анализ крови на антинуклеарный фактор; антитела против ядерных антигенов;нтинуклеарный фактор на HEp‑2 клетках, IgG; АНФ; АНА/ antinuclear antibodies (ANA); Hep-2 substrate; ANA-Hep2; fluorescent AntiNuclear antibody detection (FANA)

Оборудование: А/Е/Н