Исследование на энтеровирусную инфекцию в Санкт-Петербурге

Энтеровирус  

Энтеровирусы — род одноцепочечных РНК-вирусов, включающий 15 видов (по ревизии 2019 года), более 100 серотипов. Ранее в род входил 71 вид, в том числе вирусы полиомиелита, вирусы Коксаки и другие патогенные для человека серотипы. Энтеровирусы имеют повсеместное распространение, они резистентны к кислой среде и бытовым дезинфицирующим средствам, способны сохраняться при комнатной температуре несколько суток.

Все вирусы рода Enterovirus имеют сходный механизм развития заболевания и его проявлений. Возбудитель попадает в ЖКТ фекально-оральным путём, реплицируется в эпителии слизистой ЖКТ и через кровь распространяется по организму, поражая разные ткани, органы и целые системы. В связи с особенностями инвазии для исследований на инфицированность берут ликвор, кал, отделяемое носоглотки.

Острая фаза инфекции обычно проходит без симптомов, а развитие клинической картины требует некоторого времени после первичной инвазии. Такая особенность заболевания должна учитываться при выборе биоматериала, который направляют на исследование.

Определение энтеровирусов с помощью ПЦР — преимущества и сложности

Подозревая энтеровирус-ассоциированную инфекцию, проводят серологические анализы, молекулярную диагностику, выделяют вирус в культуре клеток.

Молекулярная диагностика (ПЦР) выявляет в биоматериале фрагменты РНК энтеровируса. Молекулярный анализ обладает высокими специфичностью и чувствительностью, даёт точный результат быстрее, чем другие исследования, потому для врачей и пациентов он незаменимый инструмент в скорой и точной диагностике энтеровирус-ассоциированной инфекции любого вида.

ПЦР — золотой стандарт для диагностики менингоэнцефалита, вызванного Enterovirus-ассоциированной инфекцией. Для исследования в этом случае берут ликвор (цереброспинальную, спинномозговую жидкость), в результате получают до 97 % чувствительности (способности обнаружить фрагменты вируса в биоматериале) и до 100 % специфичности (способности определить вид вируса).

Столь высокие показатели, максимально приближенные к идеалу, позволили заменить молекулярной диагностикой ещё один прямой способ определения возбудителя — выявление энтеровируса в клетках эмбриона.

Однако тестирование ликвора, который взяли в первые двое суток появления симптомов менингоэнцефалита, менее чувствительно. Также меньшей чувствительностью обладает исследование каловых масс, отделяемого носоглотки, мазка, отделяемого язв, то есть нестерильного биологического материала. Эту особенность нужно учитывать, если результат теста отрицательный, при этом пациент имеет признаки энтеровирусной инфекции.

Для множество ложноотрицательных результатов причиной становится полная элиминация энтеровируса (исчезновение) из клеток желудочно-кишечного тракта к тому моменту, когда проявились симптомы болезни: в глоточном эпителии вирус реплицируется до 14 дней, в ЖКТ — до 90 дней.

Ложноположительные результаты исследования нестерильных типов биоматериала возникают в связи с тем, что бессимптомное носительство энтеровируса чрезвычайно распространено в популяции людей.

ПЦ-реакция выявляет собственно РНК энтеровируса, потому отлично работает даже на ранних этапах заболевания. В то время как серологические тесты требуют от 14 до 32 дней для отслеживания уровня специфических антител и постановки диагноза. Но скорость ПЦР-диагностики имеет и свой недостаток — с её помощью не удаётся различить стадии острой и хронической энтеровирусной инфекции.

Так как с помощью ПРЦ определяют общий для видов энтеровирусов фрагмент РНК, реакция устанавливает присутствие любых представителей рода. А возможности современных серологических методов ограничены только 11 видами.

Недостатком такой чувствительности в некоторых случаях становится невозможность различить виды энтеровирусов между собой: это важно при дифференциации Сoxsackievirus type A 16 (ассоциированное поражение нервной системы) и EV71. Потому диагностика болезней, причиной которых стали энтеровирусы, требует дополнительного тестирования и инструментального исследования.

EV71 — один из самых патогенных в роду энтеровирусов человека, способен вызывать летальный исход. Особенно опасен он для детей в возрасте до 10 лет, а самые сложно корректируемые последствия заболевания появляются у детей до 2 лет.

Цели тестирования

ПЦР используют, чтобы выявить заболевания, ассоциированные с инвазией энтеровирусами:

• менингит — воспаление мягких, паутинных и твёрдых мозговых оболочек;

• миоперикардит — воспаление миокарда в результате сердечной инфекции;

• герпетическую ангину (герпангину, энтеровирусный везикулярный фарингит);

• полиомиелит;

• вирусную пузырчатку конечностей и полости рта. 

При каких симптомах назначают исследование: 

• при менингите, проявляющемся в головной боли, лихорадке, раздражительности, тошноте и рвоте, которая не приносит облегчения, в ригидности (напряжении) затылочных мышц;

• при герпетической ангине, проявляющейся в остром старте болезни, лихорадке на фоне высокой температуры 39-40 ºС, в тошноте, рвоте, головных болях, болезненной шейной лимфаденопатии (увеличение лимфоузлов), везикулёзной сыпи на слизистой твёрдого и мягкого нёба, миндалин, боли при глотании;

• при вирусной пузырчатке полости рта, конечностей, проявляющейся в лихорадке, кашле разной интенсивности, везикулёзной сыпи на кожных покровах стоп и кистей, на слизистой ротовой полости;

• при миоперикардите, проявляющемся в загрудинной боли, которая ослабевает во время наклона вперёд и усиливается на вдохе, в одышке, периферических отёках, в нарушении сердечного ритма;

• при полиомиелите, проявляющемся в лихорадке, тошноте, головной боли, абдоминальных болях, в парезе и даже параличе конечностей, мышц, нарушении глотания, пронации — естественного способа постановки стопы при движении.

Синонимы: анализ кала на энтеровирусную инфекцию/ EV, RNA

Оборудование: Neon-100/ Xiril, Rotor-Grnr 3000/Corbett Research, Австралия, Rotor-Grnr 6000/ Corbett Research, Dtprime/ ДНК-технологии, Gradient Palm-Cycler/ Corbett Research, iCycler iQ5/ Bio-Rad Laboratoris, АЛА-1/4/ SIA "BioSan"